中文名稱：IDO抑制劑(Navoximod)

英文名稱：Navoximod

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7955

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人 PSMG3 基因全長ORF克隆小鼠成纖維細胞生長因子8(FGF8)免疫試劑盒進口、組裝

人 AAMDC 基因全長ORF克隆小鼠成纖維細胞生長因子6(FGF6)免疫試劑盒進口、分裝

人 GBP5 基因全長ORF克隆小鼠成纖維細胞生長因子4(FGF4)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人 COIL 基因全長ORF克隆小鼠成纖維細胞生長因子13(FGF-13)免疫試劑盒*直銷

人 NUSAP1 基因全長ORF克隆小鼠成纖維細胞生長因子10(FGF10)免疫試劑盒進口、組裝

人 RAB3B 基因全長ORF克隆小鼠成神經(jīng)細胞瘤RAS 病毒(v-ras)癌基因同源物免疫試劑盒進口、分裝

人 CHMP5 基因全長ORF克隆小鼠超氧化物歧化(SOD)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人 SARNP 基因全長ORF克隆小鼠超敏C反應蛋白(hs-CRP)免疫試劑盒*直銷

人 ARL11 基因全長ORF克隆小鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)免疫試劑盒進口、組裝

人 ARL8A 基因全長ORF克隆小鼠長停滯特異性基因產(chǎn)物6(gas-6)免疫試劑盒進口、分裝

人 FATE1 基因全長ORF克隆小鼠叉頭框蛋白03(FoxP3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

IDO抑制劑(Navoximod)IKK2抑制劑（LY2409881）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  LY2409881100mL 植酸 Phytic Acid 室溫陰涼保存

TRPM8離子通道激動劑（Icilin）  1mL(10mM)|10mg|50mg  Icilin50T 人細小病毒B19PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

PKC抑制劑（CGP60474）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  CGP604745 g  Glucosamine （胰島素抵抗誘導劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

DNA合成抑制劑（Nelarabine）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Nelarabine25mL Denhardt’s Solution,50X Denhardt’s Solution,50X 常溫保存

microtubule抑制劑(Ixabepilone)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  Ixabepilone5次 超快核酸轉(zhuǎn)膜試劑盒B（尼龍膜） Rapid Nucleic Acid Blotting Kit 常溫

Topo II抑制劑（Pirarubicin鹽酸鹽）  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  Pirarubicin Hydrochloride2 ug pIEXBac-c-EGFP-4 pIEXBac-c-EGFP-4 低溫運輸，-20℃保存

MEK變構抑制劑(TAK-733)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg  TAK-733曲瓊脂基礎(AFPA) AFPA 250g

FAK自磷酸化抑制劑(Y15)  1mL(10mM)|10mg|50mg  Y151瓶 K562細胞株 K562 低溫運輸和保存

泛HER激酶不可逆抑制劑（Poziotinib）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  PoziotinibLB肉湯（Lennox） LB Broth 250g

Src激酶家族抑制劑(SU6656)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  SU6656250U 腺苷脫氨 Adenosine Deaminase 4℃保存

免疫抑制劑（6-Mercaptopurine）  1mL(10mM)|50mg|100mg|500mg  6-Mercaptopurine250mL Sodium Phosphate Buffer（鈉緩沖液）,0.5M,pH7.5  Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.5  常溫保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)