細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：I型HDAC抑制劑（4SC-202 free base）

英文名稱：4SC-202 free base

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8163

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

人 SULT1B1 基因全長ORF克隆人黃氧化(XOD)免疫試劑盒*直銷

人 ALOX5AP 基因全長ORF克隆人環(huán)腺苷(cAMP)免疫試劑盒進口、組裝

人 LTC4S 基因全長ORF克隆人環(huán)鳥苷(cGMP)免疫試劑盒進口、分裝

人 ADCK2 基因全長ORF克隆人環(huán)加氧2(COX-2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 NLK 基因全長ORF克隆人踝蛋白(talin)免疫試劑盒*直銷

人 RPA2 基因全長ORF克隆人花生四烯酸5脂氧合(ALOX5/LOG5)免疫試劑盒進口、組裝

人 DKK4 基因全長ORF克隆人花生四烯酸15脂加氧(ALOX15/LOG15)免疫試劑盒進口、分裝

人 CSNK1G1 基因全長ORF克隆人花生四烯酸12 - 脂氧合，12S型(ALOX12/LOG12)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 CST1 基因全長ORF克隆人花生四烯酸(AA)免疫試劑盒*直銷

人 CST2 基因全長ORF克隆人琥珀酰輔A合成(SCS)免疫試劑盒進口、組裝

人 CDKL4 基因全長ORF克隆人紅細胞原卟啉(EP)免疫試劑盒進口、分裝

I型HDAC抑制劑（4SC-202 free base）μ-opioid受體激動劑  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg  Endomorphin 11g 潮 B Hygromycin B 4℃保存

速激肽NK1受體激動劑  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg  [Sar9,Met(O2)11]-Substance P50T 藍舌病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

TrkB/TrkC神經(jīng)營養(yǎng)因子受體激活劑  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  LM22B-105mL 成纖維細胞生長因子-2 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

EAAT1抑制劑(UCPH-101)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  UCPH-10125mL Agarose Gel Loading Buffer-Glycero (甘油型上樣液)，6X    Agarose Gel Loading Buffer-Glycero ，6X    常溫保存

TREK-1和TREK-2激活劑(ML335)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  ML33510mL DNA上樣液 (紅色),6×（非甘油） DNAON  4℃保存

5-HT2A受體反向激動劑  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg  Pimavanserin tartrate2 ug pGL4.17[luc2/Neo] pGL4.17[luc2/Neo] 低溫運輸，-20℃保存

phosphodiesterase9抑制劑  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  BAY 73-6691 racemate抗生素檢定培養(yǎng)基1號（低pH) AntibioticAgar  250g

TREK-1激活劑(ML402)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  ML4021瓶 CRT細胞株 CRT 低溫運輸和保存

5-HT3受體和鉀通道抑制劑(Eucalyptol)  1mL(10mM)|50mg  EucalyptolTCBS瓊脂平板（9cm） Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar 10個/包

Sigma-1受體激動劑  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  AVex-73 hydrochloride100mg 辣根過氧化物，偶聯(lián)級 Horseradish Peroxidase，Conjugation Grade -20℃保存

α/β水解酶結(jié)構(gòu)域6(ABHD6)抑制劑(WWL70)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg  WWL70250mL PIPES Buffer，1.0M, pH6.8  PIPES Buffer，1.0M, pH6.8  常溫保存