特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。 產(chǎn)品名稱 | 磷脂酶D測試盒100管/96樣 | 規(guī)格 | 100管/96樣 | 檢測方法 | 微量法 | 貨號(hào) | BJ-01S9844 |
商品介紹: 測定意義: 磷脂酶D(EC3.1.4.4)即磷脂酰水解酶,是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱,廣泛存在于高等動(dòng)植物和細(xì)菌等多種生物體中,具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號(hào)傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。 測定原理 磷脂酶D催化水解磷脂酰末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和,在氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫,過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì),在500nm處有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、微量石英比色皿、恒溫水浴鍋,無水乙醇。 |
測定步驟: 1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。 2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。 3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制) 4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。 5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑) 選擇抗凝的注意點(diǎn): ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致; ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固; ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿); ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。 操作步驟: 實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。 1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。 3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。 5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。 8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。 豹源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Herba lycopi澤蘭染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Neisseria meningitidis Group C腦膜炎奈瑟C群探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Actinomyces pyogenes化膿放線LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Respiratory Syncytial Virus-B(RSV-B)呼吸道合胞病毒B型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Duck Tambusu Virus(TMUV)鴨坦布蘇病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Semen pruni郁李仁染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Avian Paramyxovirus 3(APMV)禽副粘病毒3型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Amapari virus(AMAV)阿馬帕里病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Tamiami virus(TAMV)太米阿米病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Chlamydophila psittaci鸚鵡熱嗜衣原體LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Flos farfarae款冬花探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 磷脂酶D測試盒100管/96樣精漿果糖含量比色法定量檢測試劑盒 20次 紅細(xì)胞可溶性膜蛋白(粗提)制備試劑盒 20次 麥黃酮(Tricine)蛋白凝膠電泳試劑盒 10次 動(dòng)物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 10次 細(xì)(慶大)敏感性DISC彌散(KIRBY-BAUER)檢測試劑盒 20次 細(xì)胞堿性活性染色試劑盒 50次 同位素核酸蛋白結(jié)合凝膠遷移電泳分析(EMSA)試劑盒 20次 定量檢測試劑盒 人載脂蛋白A1標(biāo)準(zhǔn)溶液 細(xì)胞RHO 蛋白表達(dá)比色法定量檢測試劑盒 10/50 次 真/酵母細(xì)胞染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒 10次 |