產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細(xì)介紹：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

山茱萸苷

英文名：   Verbenalinp

英文別名：   cyclopenta(c)pyran-4-carboxylicacid,1,4a,5,6,7,7a-hexahydro-1-(beta-d-glucopy;ranosyloxy)-7-methyl-5-oxo-,methylester,(1s-(1-alpha,4a-alpha,7-alapha,7a-a

CAS登錄號：   548-37-8

分子式：   C17H24O10

(R型)人參皂苷Rg2

英文名：   20(R)Ginsenoside Rg2

CAS登錄號：   80952-72-3

分子式：   C42H72O13

分子量：   784.49

商陸皂苷甲

英文名：   EsculentosideA

英文別名：   (2b,3b,4a,20b)-3-((4-O-beta-D-Glucopyranosyl-beta-D-xylopyranosyl)oxy)-2,23-dihydroxyolean-12-ene-28,29-dioic acid 29-methyl ester

CAS登錄號：   65497-07-6

分子式：   C42H66O16

升麻醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷

英文名：   CiMigenol 3-β-D-xylopyranoside

英文別名：   CiMigenol 3-O-β-D-xyloside

CAS登錄號：   27994-11-2

分子式：   C35H56O9

20(R)原人參三醇

英文別名：   (20R)-5α-Dammar-24-ene-3β,6α,12β,20-tetrol;(20R)-Dammar-24-ene-3β,6α,12β,20-tetrol;(20R)-Protopanaxatriol

CAS登錄號：   1453-93-6

分子式：   C30H52O4

分子量：   476.73

龍血素B

英文別名：   1-Propanone,1-(4-hydroxyphenyl)-3-(2,4,6-trimethoxyphenyl)

CAS登錄號：   119425-90-0

分子式：   C18H20O5

分子量：   316.35

辛夷脂素

英文名：   Fargesin

英文別名：   (1R)-4β-(1,3-Benzodioxole-5-yl)-3aβ,4,6,6aβ-tetrahydro-1α-(3,4-dimethoxyphenyl)-1H,3H-furo[3,4-c]furan

CAS登錄號：   31008-19-2

分子式：   C21H22O6

苦玄參苷IA

英文名：   Picfeltarraenin IA

英文別名：   PicfeltarraegeninⅠ3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)

CAS登錄號：   97230-47-2

分子式：   C41H62O13

白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ

英文名：   2-Atractylenolide

英文別名：   4aS,8aR,9aS)-4a,5,6,7,8,8a,9,9a-Octahydro-3,8a-dimethyl-5-methylenenaphtho[2,3-b]furan-2(4H)-one

CAS登錄號：   73069-14-4

分子式：   C15H20O2

大葉茜草素

英文名：   Mollugin

英文別名：   Rubimaillin；,2-Dimethyl-6-hydroxy-2H-naphtho[1,2-b]pyran-5-carboxylic acid methyl ester

CAS登錄號：   55481-88-4

分子式：   C17H16O4

槐角堿

分子結(jié)構(gòu)：     

外觀：   白色結(jié)晶

規(guī)格：   20 mg/支

純度：   ≥ 98%

己糖激酶抑制劑(Lonidamine)活細(xì)胞核染料吖啶橙  25mg  Acridine Orange；AO10000mU 三腺苷雙 Apyrase -20℃保存

死細(xì)胞核7-AAD染料  1mg  7-amino-actinomycin D500mL PIPES Buffered Saline，5X,pH6.8  PIPES Buffered Saline，5X,pH6.8  常溫保存

活細(xì)胞核酸染料-綠菁SYT  500μL  10mL 氨芐溶液,50mg/mL Ampicillin Solution -20℃保存

死細(xì)胞核酸染料-綠菁SYTOX  500μL  2 ug pPink HC pPink HC 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

細(xì)胞核染料DAPI  10mg|1mg  麥芽糖發(fā)酵管  20支

死細(xì)胞核染料(碘化丙啶)  20mg|5mg|10mg  PI2 ug pcDNA3.2（zeo）+ pcDNA3.2（zeo）+ 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

細(xì)胞膜橙紅色熒光探針(DiI)  10mg  DiI葡萄糖斜面瓊脂（AGS） Arginine Dextrose Agar 100

細(xì)胞膜紅色熒光染料(DiD)  10mg  DiD25g L-  L-Histidine  室溫干燥保存

鈣黃綠素AM  10μg  Calcein,AM50T 空腸彎曲桿菌/大腸彎曲桿菌/海鳥彎曲桿菌flaA基因(450bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

細(xì)胞質(zhì)綠色熒光染料  100μL  500 mL IMDM培養(yǎng)基（含1%雙抗） Cell Culture Medium -20℃保存

Hoechst33258染色試劑盒  100T  Apoptotic Cell Hoechst 33258 Detection Kit500mL Acrylamide Solution（丙烯酰胺溶液），30%  Acrylamide Solution，30%  常溫保存