操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

中文名稱：PI3K γ和δ抑制劑（TG100-115）

英文名稱：TG100-115

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X7842

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

延胡索甲素

英文別名：   2,3,9,10-tetramethoxy-13-alpha-methyl-13a-beta-berbin

CAS登錄號(hào)：   518-69-4

分子式：   C22H27NO4

分子量：   369．44

芫花素

英文名：   Genkwanin

英文別名：   4H-Benzopyran-4-one

CAS登錄號(hào)：   437-64-9

分子式：   C16H12O5

野黃芩素

英文名：   Scutellarein

英文別名：   4',5,6,7-Tetrahydroxyflavone; 5,6,7-Trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one

CAS登錄號(hào)：   529-53-3

分子式：   C15H10O6

喬松素

英文名：   Pinocembrin

英文別名：   (s)-2,3-dihydro-5,7-dihydroxy-2-phenyl-4h-1-benzopyran-4-one

CAS登錄號(hào)：   480-39-7

分子式：   C15H12O4

反式茴香腦

英文別名：   (E)-1-METHOXY-4-(1-PROPENYL)BENZENE

CAS登錄號(hào)：   104-46-1

分子式：   C10H12O

分子量：   148.2

3, 6′-二芥子酰基蔗糖

英文別名：   DISS

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C34H42O19

分子量：   754.68

人參皂苷Rk1

英文名：   Ginsenoside Rk1

英文別名：   3β,12β-dihydroxydammar-20(21),24-diene-3-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranoside

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C42H70O12

人參皂苷Rg6

英文名：   Ginsenoside Rg6

英文別名：   [dammar-20（21），24-diene-3β，6α，12β-trihydroxy-6-O-α-L-rhamnopyranosyl（-1→2）-β-D-glucopyranoside]

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C42H70O12

羅漢果苷III

英文名：   Mogroside III

CAS登錄號(hào)：   130567-83-8

分子式：   C48H82O19

分子量：   963.15

羅漢果苷VI

英文名：   Mogroside VI

CAS登錄號(hào)：   89590-98-7

分子式：   C66H112O34

分子量：   1449.58

表兒茶素

英文名：   Epicatechin

英文別名：   CIS-2-[3,4-DIHYDROXYPHENYL]-3,4-DIHYDRO-2H-1-BENZOPYRAN-3,5,7-TRIOL

CAS登錄號(hào)：   490-46-0

分子式：   C15H14O6

PI3K γ和δ抑制劑（TG100-115）Annexin V-FITC/PI雙染法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒  20次/50次/100次  Cell proliferation and toxicity detection kit1 g  Metformin （LKB1-AMPK激活劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

Tunel細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（FITC）  10次/20次/50次  Tunel cell apoptosis detection kit（FITC）100mL CAPSO Buffer,0.2M,pH9.5  CAPSO Buffer,0.2M,pH9.5  常溫保存

轉(zhuǎn)染試劑  0.75ml/1ml/1.5ml  100 mL F12培養(yǎng)基（含10%胎牛血清） Cell Culture Medium -20℃保存

細(xì)胞周期與凋亡檢測(cè)試劑盒  50次/200次/500次  2 ug pGRE-Luc pGRE-Luc 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

高保真KOD試劑盒  50U/200U/1000U  培養(yǎng)基R Medium R (Lactose monohydrate sulphite medium) 250g

細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒（CCK-8）  100次/500次/3000次/10000次  1瓶 HMy2.CIR細(xì)胞株 HMy2.CIR 低溫運(yùn)輸和保存

線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1法)  50T|100T  單料緩沖蛋白胨水管  10ml*20支

線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10法)  100T  1mg 二硫鍵異構(gòu)，人 Disulfide Isomerase -70℃保存

Caspase-8活性測(cè)定試劑盒  20T|50T|100T  Caspase-8 Activity colorimetric assay Kit125mL Sodium Acetate Solution（乙酸鈉溶液）,3M,pH7.0   Sodium Acetate Solution,3M,pH7.0   常溫保存

Caspase-6活性測(cè)定試劑盒  20T|50T|100T  Caspase-6 Activity colorimetric assay Kit1 管 Rosetta(DE5)大腸桿菌  

Caspase-5活性測(cè)定試劑盒  20T|50T|100T  Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit2 ug pRSET B pRSET B 低溫運(yùn)輸，-20℃保存