細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：menin和MLL融合蛋白相互作用抑制劑(MI-538)

英文名稱：MI-538

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8263

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

人 SPINT2 / HAI-2 基因全長ORF克隆犬內(nèi)毒素(ET)免疫試劑盒*直銷

人 HAPLN1 基因全長ORF克隆犬繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 LEP R 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆犬免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 GNLY / Granulysin 轉(zhuǎn)錄變體NKG5 基因全長ORF克隆犬免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 GNS / G6S 基因全長ORF克隆犬免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒*直銷

人 FetuinA / AHSG 基因全長ORF克隆犬免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 Cadherin-12 基因全長ORF克隆犬硫酸雌酮(E1S)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 FLT3LG 轉(zhuǎn)錄變體3 基因全長ORF克隆犬粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 FGF5 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆犬類胰蛋白免疫試劑盒*直銷

人 FGF12 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆犬類風(fēng)濕因子(RF)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 KLKB1 基因全長ORF克隆犬抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素(AVP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

menin和MLL融合蛋白相互作用抑制劑(MI-538)山楂酸(Maslinic acid)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg  Maslinic acid沙氏葡萄糖瓊脂 Sabouraud’s Glucose chloramphenicol Agar 250g

兒茶素（Catechin）  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  Catechin1瓶 MR1[derivative of HB-11048]細(xì)胞株 MR1[derivative of HB-11048] 低溫運(yùn)輸和保存

柯諾辛堿(Corynoxine)  1mL(10mM)|5mg|10mg  Corynoxine桔汁瓊脂 Orange Serum Agar 250g

Carmofur  1mL(10mM)|100mg|500mg  Carmofur100g 吸附樹脂 XAD7 Amberlite XAD7 常溫保存

內(nèi)皮素A(ETA)受體拮抗劑（Zibotentan）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  ZibotentanCary-Blair氏運(yùn)送培養(yǎng)基管 Cary-Blair Transport Medium 20支/包

Hydroxyfasudil hydrochloride  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  Hydroxyfasudil hydrochloride5mL 肝素瓊脂糖 Heparin Agarose 4℃保存

生化檢測試劑盒    2 ug pTaq pTaq 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

活性氧檢測試劑盒(熒光探針法)  >100次  Reactive Oxygen Species Assay Kit100g RNTris Base (三羥甲基氨基甲烷)  常溫

過氧化氫檢測試劑盒  150次  Hydrogen Peroxide Assay Kit2 ug pDR196 pDR196 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

過氧化氫酶檢測試劑盒  100次  Catalase Assay Kit鈉溶液（12mg） Sodium sulfadiazine 1ml*5

GSSG和GSH檢測試劑盒  共100次  GSH and GSSG Assay Kit100mL 交聯(lián)瓊脂糖凝膠 2B Sepharose CL-2B 4-8℃保存