細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：GSK-3抑制劑(LY2090314)

英文名稱：LY2090314

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7493

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

Potato spindle tuber viroid(PSTVd)馬鈴薯紡錘塊莖類病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周DHRS4  短鏈脫/還原家族4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Cryptosporidium serpentis蛇形隱孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Desmocollin 1  橋粒糖蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Japanese Encephalitis Virus(JEV)日本腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgG-Fc  兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 1mgC21orf55/DnaJC28  21號染色體開放閱讀框55抗體 規(guī)格: 0.2ml

Helicobacter suis豬螺桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MYBPC1  肌球蛋白結合蛋白C抗體 規(guī)格: 0.2mlSAHH  S苷L-同型半胱水解 規(guī)格: 0.2ml

Semen astragali complanati沙苑子探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周phospho-DVL2(Thr224)  磷酸化蓬亂蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlHIP4/CBS  絲羧甲半胱合成抗體 0.1ml

Bovine Rhinitis A Virus (BRAV)牛鼻炎病毒A型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ADAMTS9  整合素樣金屬蛋白與凝9型抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Chicken IgG/RBITC  羅丹明標記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.3ml

Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus(ISKNV )傳染性脾腎壞死病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Mink IgG/PE  PE標記的兔抗水貂IgG 規(guī)格: 0.1mlCDC20B  細胞分裂周期蛋白20B抗體 規(guī)格: 0.2ml

Simian Foamy Virus(SFV)猴泡沫病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CA I/Carbonic anhydrase 1  碳酸酐1抗體 規(guī)格: 0.2mlPAICS  磷酸核糖胺咪唑羧化抗體 規(guī)格: 0.2ml

綿羊源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Goat IgG/APC  APC標記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1mlCyclin B2  周期素B2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Tritrichomonas foetus胎兒三毛滴蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Tau protein  微管相關蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlFOXC1/FREAC3  叉相關轉錄因子3抗體 規(guī)格: 0.1ml

GSK-3抑制劑(LY2090314)PI4KIIIβ抑制劑（PI4KIIIbeta-IN-10）

hedgehog抑制劑（Mebendazole）

HBV抑制劑（Entecavir）

RSV聚合酶抑制劑(ALS-8176)

FabI抑制劑（AFN-1252）

CYP3A4抑制劑（Clarithromycin）

RNA polymerase抑制劑（T 705）

HIV-1病毒顆粒成熟抑制劑（Bevirimat）

HCV NS5B polymerase抑制劑（PSI-6130）

病毒RdRp聚合酶抑制劑（BCX4430 freebase）

組蛋白磷酸化抑制劑(Maribavir)