操作步驟: 實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。 1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。 3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。 5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。 8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。 特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。 產(chǎn)品名稱 | 3磷酸甘油酸激酶測(cè)試盒100管/96樣 | 規(guī)格 | 100管/96樣 | 檢測(cè)方法 | 微量法 | 貨號(hào) | BJ-01S9804 |
商品介紹: 測(cè)定意義: 3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶,廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi),催化1,3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸甘油酸,產(chǎn)生1分子ATP,具有影響DNA復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒RNA合成等生物學(xué)功能,廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)設(shè)計(jì)。 測(cè)定原理 3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP,1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸,340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿。 |
測(cè)定步驟: 1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。 2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。 3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制) 4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。 5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑) 選擇抗凝的注意點(diǎn): ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致; ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固; ③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿); ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。 Norwalk Viruses G2(NV-2)諾如病毒G2型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 牛源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Cortex lycii地骨皮探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Pseudomonas fuscovaginae褐鞘假單胞PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Herba andrographisLAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Human T-cell Lymphoma Virus(HTLV)人類嗜T淋巴 病毒通用探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Streptococcus iniae海豚鏈球探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Radix aconiti kusnezoffii草烏探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Trichinella nativa鄉(xiāng)土旋毛蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Pseudomonas syringae pv. sesami丁香假單胞桿芝麻致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Proteus penneri彭氏變形探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Citrus Tristeza Virus(CTV)柑橘衰退病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 3磷酸甘油酸激酶測(cè)試盒100管/96樣細(xì)胞溶體脂(酸性脂)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次 細(xì)莢膜(CAPSULE)染色試劑盒 50次 血液二氧化碳(CO2)濃度偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次 CASPASE-4蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 5次 mTSB肉湯 英文名稱:mTSB Broth With Novobiocin 產(chǎn)品規(guī)格:250g 大鼠ERβ基因甲基化檢測(cè)試劑盒 20次 ANDROGEN RECEPTOR 蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 5次 GMS10細(xì) 1毫升 胰蛋白抗原修復(fù)溶液 50毫升 全組織免疫組織化學(xué)AP聯(lián)NBT/BCIP*間接檢測(cè)試劑盒(含一抗和AP二抗) 10次 冰凍切片肌肉化(Myophosphorylase)活性染色 50次 |