操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:酵母活性檢測試劑盒-AlamarBlue 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250T|500T|1000T 產(chǎn)品貨號:BJ-01X6518 AlamarBlue 酵母活性檢測試劑盒是應(yīng)用新型的氧化還原指示劑阿爾瑪藍(lán)快速高靈敏度檢測酵母活性的比色檢測產(chǎn)品。 AlamarBlue 是一種氧化還原指示劑,能根據(jù)酵母的代謝活性產(chǎn)生吸光度變化和熒光信號。這種測定是基于具有代謝活性的細(xì)胞將試劑轉(zhuǎn)換成熒光和比色指示劑的能力。受損和無活性細(xì)胞具有較低的天然代謝活性,因此對應(yīng)的信號較低。 AlamarBlue 在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無熒光性,而在還原狀態(tài)下,轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物,其吸收峰為530-560nm,而散射峰為590nm。在酵母細(xì)胞增殖過程中,細(xì)胞內(nèi)處于還原環(huán)境。進(jìn)入酵母細(xì)胞內(nèi)的活性檢測染料被代謝中間體及細(xì)胞色素類還原后釋放到酵母細(xì)胞外并溶于培養(yǎng)基中,使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。后用普通分光光度計(jì)或熒光光度計(jì)進(jìn)行檢測,吸光度和熒光強(qiáng)度與活性酵母細(xì)胞數(shù)成正比。染料經(jīng)過驗(yàn)證安全無毒,可以用于酵母細(xì)胞活性和酵母細(xì)胞增殖的定量分析細(xì)胞毒性研究。 AlamarBlue 的無毒特性使酵母細(xì)胞可長期暴露于這種染料,因此可隨時間進(jìn)行測量或進(jìn)行終點(diǎn)測量。 AlamarBlue 法采用單一試劑,可以連續(xù)、快速地檢測酵母細(xì)胞的增生狀態(tài)。由于AlamarBlue對酵母細(xì)胞無毒、無害,不影響細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成與分泌等活性,因此可以對同一批酵母細(xì)胞的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察,因此有操作簡便和幾乎不干擾酵母細(xì)胞正常代謝的特點(diǎn)。 儲存條件:檢測液2-8℃避光保存; 有效期:一年。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 E.coli大腸桿通用探針法熒光定量PCR試劑盒(含致病性和非致病性) 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Xanthomonas hortorum pv. pelargonii野油菜黃單胞天竺葵致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Herba lobeliae chinensis半邊蓮LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Radix dichroae常山LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Human Metapneumo Virus(hMPV)人偏肺病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 獼猴源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Ramulus cinnamomi桂枝PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Gyrodactylus salaris三代蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 杏仁源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Streptococcus sanguinis 血紅鏈球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Eperythrozoon wenyoni牛附紅 體(牛嗜血支原體)探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Soil-borne Wheat Mosaic Virus(SbWMV)土壤傳播的小麥花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 酵母活性檢測試劑盒-AlamarBlue山羊白介素12(IL-12/P40)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 大鼠催乳素(PRL)免疫試劑盒*直銷 人細(xì)胞膜DNA抗體(cmDNA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 魚乙酰酯(AChE)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人內(nèi)皮抑素(ES)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 V-P半固體瓊脂 英文名稱:Voges-Proskauer Semisolid Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人抗G2s抗體(IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)(2015藥典) 英文名稱:TSB 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人低氧誘導(dǎo)因子3α(HIF-3α)免疫試劑盒*直銷 乳糖(腦膜炎奈瑟氏菌專用) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20ml/支 人P2蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
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