中文名稱：MDM2抑制劑(SAR405838)

英文名稱：SAR405838

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X7837

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

鬧羊花毒素V

英文別名：   (2β,3β,14R)-2,3-Epoxygrayanotoxane-5,6β,10,14,16-pentol 14-acetate

CAS登錄號(hào)：   37720-86-8

分子式：   C26H40O9

分子量：   496.59

鬧羊花毒素III

英文別名：   (2β,3β,14R)-2,3-Epoxygrayanotoxane-5,6β,10,14,16-pentol

CAS登錄號(hào)：   26342-66-5

分子式：   C20H32O6

分子量：   368.467

鬧羊花毒素II

英文別名：   (14R)-2β,3β-Epoxygrayanotoxane-5,6β,10,14,16-pentol 6-acetate

CAS登錄號(hào)：   26116-89-2

分子式：   C22H34O7

分子量：   410.50

丹皮酚原苷

英文名：   1-[4-methoxy-2-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-[[(2R,3R,4S,5S)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxy-phenyl]ethanone

CAS登錄號(hào)：   72520-92-4

分子式：   C20H28O12

分子量：   460.43

北美芹素

英文別名：   (Z)-2-Methyl-2-butenoic acid [(9R)-9-acetoxy-9,10-dihydro-8,8-dimethyl-2-oxo-2H,8H-benzo[1,2-b:3,4-b']dipyran-10α-yl] ester

CAS登錄號(hào)：   13161-75-6

分子式：   C21H22O7

分子量：   386.398

紫草酸

英文別名：   4--2-(3,4-dihydroxy-phenyl)-7-hydroxy-2,3-dihydro-benzofuran-3-carboxylic acid

CAS登錄號(hào)：   28831-65-4

分子式：   C27H22O12

分子量：   538.459

靈芝酸A

英文別名：   (25R)-7β,15α-Dihydroxy-3,11,23-trioxo-5α-lanost-8-en-26-oic aci

CAS登錄號(hào)：   81907-62-2

分子式：   C30H42O7

分子量：   514.65

3-O-D-葡萄糖(1→4)-[ L-鼠李糖(1→2)]-L-阿拉伯糖-23-羥基羽扇豆20(29)-烯-28–酸

英文名：   23-hydroxyl lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-O-b-D-glucopyranosyl(1→4)[-L-rhamnopyranosyl) (1→2)--L-arabinopyranoside]

CAS登錄號(hào)：   848784-85-0

分子式：   C47H76O17

分子量：   912

3-O-D-葡萄糖( 1→4)-[ L-鼠李糖(1→2)]-L-阿拉伯糖-常春藤配基- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷

英文名：   3-O-D-glucopyranosyl( 1→4)- [ L-rhamnopyranosyl(1→2)]-L-arabinopyranosyl 23-hydroxyl lup-20(29)-en-28-oic acid – 28-O-rhamnopyranosyl(1→4)glucopyranosyl(1→6)glucopyranoside

CAS登錄號(hào)：   68027-14-5

分子式：   C65H106O31

分子量：   1382

3-O-D-葡萄糖( 1→4)-[ L-鼠李糖(1→2)]-L-阿拉伯糖-23-羥基羽扇豆20(29)-烯-28–酸- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷

英文名：   3-O-D-glucopyranosyl( 1→3)-L-rhamnopyranosyl(1→2)-L-arabinopyranosyl lupinic acid– 28-O-rhamnopyranosyl(1→4)glucopyranosyl(1→6)glucopyranoside

CAS登錄號(hào)：   366814-43-9

分子式：   C65H106O30

分子量：   1366

Hederacolchiside E

CAS登錄號(hào)：   33783-82-3

分子式：   C65H106O30

分子量：   1366

分子結(jié)構(gòu)：     

MDM2抑制劑(SAR405838)DAPI溶液(1mg/ml)  1ml  DAPI solution,1mg/ml50次 脂蛋白純化試劑盒  

CCK-8試劑盒  100T|500T|500T*10  Cell counting KIT-82 ug pSRE-Luc pSRE-Luc 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

Hoechst 33258染色液  1mL  50次 柱式DNA清除劑 Column DNA Erasol 4℃保存

鈣熒光探針(Fluo 3-AM)  100ug|1mg  2 ug pCMV-SPORT6 TTC12 pCMV-SPORT6 TTC12 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

碘化丙啶PI  10mg  Propidium Iodide改良V-P培養(yǎng)基 V-P Medium,Modified 250g

噻唑藍(lán)MTT  250mg|1g  Thiazolyl blue tetrazolium bromid100g 聚乙烯吡咯烷酮 K360 Polyvinylpyrrolidone(PVP K360) 室溫保存

MTT細(xì)胞增值與毒性檢測(cè)試劑盒  500T  MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit50T 乳腺癌耐藥基因PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

細(xì)胞核提取試劑盒  50T|100T  Nuclear Extraction Kit200mg L-NAME（eNOS抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

線粒體提取試劑盒  50T|100T  250mL EDTA Solution（EDTA溶液）,14%,pH7.4  EDTA Solution,14%,pH7.4  常溫保存

線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)  100T  Mitochondrial Membrane Potential Kit(JC-10 Assay)0.5mL dNTP溶液，2.5 mM dNTP Solution，2.5 mM -20℃保存

吖啶橙-EB雙染色試劑盒  50ml*2|250ml*2  Acridine Orange(AO)/EB Double Stain Kit2 ug pIRES-EGFP pIRES-EGFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)