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產(chǎn)品展示
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HFL1(人肺成纖維細(xì)胞)
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產(chǎn)品型號(hào):
產(chǎn)品報(bào)價(jià):
產(chǎn)品特點(diǎn):
HFL1(人肺成纖維細(xì)胞)在冷凍保存之前,應(yīng)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)是否良好 且存活率高,凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 %冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等。
  HFL1(人肺成纖維細(xì)胞)的詳細(xì)資料:

產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。

本公司代理ATCC細(xì)胞,提供售前售后一條龍服務(wù),若要獲取詳細(xì)的說明書或價(jià)格信息,請(qǐng)咨詢?cè)诰€客服。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

HFL1(人肺成纖維細(xì)胞)

HFL1 (human lung fibroblasts)

5×106cells

?
細(xì)胞培養(yǎng)技巧:
一、凍存時(shí)的注意事項(xiàng):
1. 在冷凍保存之前,應(yīng)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 %
2. 冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等。
3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以高壓蒸汽
滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。
4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度:
4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml
4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細(xì)胞濃度不要太高,某些雜交瘤會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24 小時(shí)后。
4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6,依細(xì)胞種類而異。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。
4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml。
5. 冷凍保護(hù)劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細(xì)胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時(shí),亦應(yīng)作一個(gè)backup culture,以防止冷凍失敗。 
凍存的步驟:
1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情形。
2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。
3. 依細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1 ml) 計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細(xì)胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻,
分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。
5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設(shè)定程序之等速降溫機(jī)中,再放入液氮槽中。程序?yàn)? program 7: HB CELL 。
培養(yǎng)操作步驟
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片); 
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí); 
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
猴特異性巨噬細(xì)胞武裝因子(SMAF)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴血漿硒蛋白P(SEPP1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴蛋白激酶D1(PKD1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴絨毛膜促性腺激素α肽(CGα)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

VI型膠原α1(COL6α1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(TNPO1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TDT)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴血漿抗凝蛋白C(PC)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

猴胃蛋白酶原C(PGC)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴泛素連接酶E3A (UBE3A)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

猴解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

猴腫瘤壞死因子受體超家族成員1B(TNFRSF1B)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴補(bǔ)體因子8g(C8g)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

猴晶體蛋白(CLC)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

HFL1(人肺成纖維細(xì)胞)DUSP1/MKP1  絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

CACH6/Cav2.3  L型鈣通道蛋白a1亞型6抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-chicken IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1ml

T3  *狀素T3抗體 規(guī)格: 0.1ml

Cyclin D1/FSTL3  周期素D1抗體 規(guī)格: 0.1ml

C1orf163  1號(hào)染色體開放閱讀框163抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-RCC1 (Ser11)  磷酸化染色體濃調(diào)控蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

CLEC1/CLEC1A  C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員A抗體 規(guī)格: 0.2ml

GDF8  生分化因子8/肌肉抑制素抗體 0.2ml

Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗馬IgM 規(guī)格: 0.1ml

P311 protein  神經(jīng)再生相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

FRS2  成纖維細(xì)胞生因子受體底物2抗體 規(guī)格: 0.2ml

APOA5  載脂蛋白A5抗體 規(guī)格: 0.2ml

IL-21  白介素21抗體 規(guī)格: 0.2ml

 

 

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: HFL1 人肺成纖維細(xì)胞 5×106cells
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