ELISA動(dòng)物種類的選擇主要根據(jù)抗原的生物學(xué)特性和所要獲得抗血清數(shù)目,如一般制備抗r-免疫球蛋白抗血清,多用家兔和山羊,因動(dòng)物反應(yīng)良好,而且能夠提供足足數(shù)目的血清,用于免疫的動(dòng)物應(yīng)適齡,健壯,無(wú)感染性疾患,為雄性,此外還需十分留意動(dòng)物的飼養(yǎng),以消除動(dòng)物的個(gè)體差異以及在免疫過(guò)程中死亡的影響。放血過(guò)程中要嚴(yán)格按無(wú)菌要求進(jìn)行。在無(wú)菌前提,吸出血清,分裝(0.05~0.2ml),貯于-40℃以下冰箱,或凍干后貯存于4。取動(dòng)脈或靜脈放血時(shí),將兔放入一個(gè)特造的木匣或籠內(nèi),耳露于箱(籠)外,也可由另一人抓住兔身。為避免損失抗原,亦可用一打針器裝抗原液,另一打針器裝佐劑,二者以聚乙烯塑料管連接,然后二者往返反復(fù)抽吸,約數(shù)十分鐘后即能*乳化。交叉反應(yīng)率一般是用競(jìng)爭(zhēng)按捺曲線來(lái)判定的。若用兔,用純種新西蘭兔,一組三只,兔的體重以2~3kg為宜。
家兔是zui常用以產(chǎn)生抗體的動(dòng)物,因此這里主要討論兔血的收集。通常,特異性是以交叉反應(yīng)率來(lái)表示的。頸動(dòng)脈放血時(shí),將兔仰臥,固定于兔臺(tái),剪去頸部的毛,切開(kāi)皮膚,暴露頸動(dòng)脈,插管,放血。以不同濃度的抗原和近似抗原物質(zhì)分別做競(jìng)爭(zhēng)按捺曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率(B/T或B/B0),求出各安閑IC50時(shí)的濃度,按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。二禮拜后,可在另一耳放血。此法可反復(fù)多次放血。