細(xì)胞或細(xì)胞群體中的細(xì)胞周期進(jìn)程提供了準(zhǔn)確
因此,細(xì)胞核的熒光就從紅色(G1)變成綠色(S、G2、M),為監(jiān)控細(xì)胞周期進(jìn)程提供了一種簡單的方法。FUCCI系統(tǒng)是基于BacMam 2.0技術(shù),它利用桿狀病毒來實(shí)現(xiàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)和瞬時(shí)表達(dá)。BacMam 2.0大大提高了這種基因?qū)肫脚_的效率和實(shí)用性。
過去與BacMam 1.0不兼容的細(xì)胞類型(神經(jīng)元),或轉(zhuǎn)導(dǎo)效果不佳(一些干細(xì)胞、CHO)的細(xì)胞類型,現(xiàn)在也能通過簡單的一步過程定量轉(zhuǎn)導(dǎo)。BacMam 2.0融合了新元件,大大增強(qiáng)了轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和表達(dá)水平,故性能改善。
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞分裂的活細(xì)胞成像,它也與固定和透化處理兼容。這種細(xì)胞周期傳感器是即用型的,操作過程也很簡單——只需將Premo™ FUCCI試劑加入您的細(xì)胞,孵育過夜,并利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀觀察即可。
Click-iT® EdU assay則是我們常用的BrdU分析的替代。在DNA合成過程中,核苷類似物EdU(5-乙炔-2’-脫氧尿苷)摻入新生的DNA鏈中。EdU不是通過抗體檢測,而是基于一個(gè)click反應(yīng)——銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價(jià)反應(yīng)。EdU核苷中含有炔烴,而Alexa Fluor或Pacific Blue熒光基團(tuán)上含有疊氮化物。
利用成像技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)或高內(nèi)涵分析即可判定群體中S期細(xì)胞的比例。Click-iT® EdU標(biāo)記的一個(gè)主要優(yōu)勢在于熒光疊氮化物(分子量<~1,000)的體積遠(yuǎn)小于BrdU抗體(分子量~150,000),這樣EdU可在溫和條件下?lián)饺?,保留了抗原完整性,從而?shí)現(xiàn)了下游的抗體分析。與BrdU檢測需要苛刻條件不同,Click-iT®檢測試劑只需要標(biāo)準(zhǔn)的固定和透化即可。
它與延遲成像結(jié)合時(shí)特別有用。對于固定細(xì)胞的成像,Click-iT® EdU標(biāo)記實(shí)現(xiàn)了溫和條件下?lián)饺隕dU的檢測,測定細(xì)胞的增殖能力是一種基本方法。Life Technologies推出了一系列產(chǎn)品,可準(zhǔn)確地測定細(xì)胞在整個(gè)細(xì)胞周期中的進(jìn)程。Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor為單個(gè)、靈敏的讀數(shù)。而Click-iT® EdU assay則能檢測進(jìn)入DNA合成期的細(xì)胞,并將S期的細(xì)胞與其他細(xì)胞區(qū)分開來。