一、TH-1活性計算
1、用微量石英比色皿測定的計算公式如下:
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADPH定義為一個酶活性單位。
TH-1活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T=149×ΔA÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADPH定義為一個酶活性單位。
TH-1活性(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=74.5×ΔA÷W
(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADPH定義為一個酶活性單位。
TH-1活性(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.149×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:APADPH摩爾消光系數(shù),6.7×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02 mL;V樣總:加入提取液體積,0.5mL;T:反應(yīng)時間,10 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。
2、用96孔板測定的計算公式如下:
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADPH定義為一個酶活性單位。
TH-1活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T=298×ΔA÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADPH定義為一個酶活性單位。
TH-1活性(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=149×ΔA÷W
(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADPH定義為一個酶活性單位。
TH-1活性(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.298×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:APADPH摩爾消光系數(shù),6.7×103 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.02 mL;V樣總:加入提取液體積,0.5mL;T:反應(yīng)時間,10 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。