用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法（eg：ELISA雙抗體夾心法測定培養(yǎng)上清中IFN-γ水平）操作步驟：

1、包被：取空白 96 孔板，按 COA 用 PBS 稀釋捕獲抗體，每孔 100μl捕獲抗體工作液，室溫過夜；

2、洗板：每孔 350μl洗液，洗板 3 次；

3、封閉：加入封閉液 200 μL/孔封閉 ELISA 板，室溫孵育 1h；

4、洗板：甩去板中的封閉液體，加入洗液 350μL/孔，洗板 3 次；

6、加樣：取出包被封閉好的 96 孔板，分別加入 100μl標準品或稀釋好的樣品，標準品做復孔，室溫孵育 2h；

7、洗板：每孔 350μl洗液，洗板 3 次；

8、加酶標抗體：按 COA 用稀釋液稀釋檢測抗體，每孔 100μl檢測抗體工作液，室溫孵育 2h；

9、洗板：每孔 350μl洗液，洗板 3 次；

10、加入底物：每孔 100μl顯色液，室溫避光孵育 20min，連續(xù)觀察顏色變化；

11、加終止液：每孔 50μl終止液，輕柔混勻；

12、讀板：檢測根據(jù)酶標儀器操作方法，上機檢測 OD值，通過計算獲得所測物質(zhì)的濃度。